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    Title: 大豆根瘤菌之羧甲基纖維素分解脢之純化及免疫電子顯微鏡定位
    Other Titles: Purification and Electron Microscopic Immunolocalization of Carboxymethyl Cellulase in Soybean Rhizobia
    Authors: 胡淳怡
    Contributors: 輔英科技大學 保健營養系
    Date: 2004-08-01
    Issue Date: 2010-11-19 15:52:38 (UTC+8)
    Abstract: 豆科植物可藉由和根瘤菌的共生關係將空氣中的氮固定下來以獲得氮源。而羧甲基纖維素分解. (E.C 3. 2. 1. 4, CM-cellulase) 為根瘤菌與植物進行共生固氮作用時,根瘤菌分解植物細胞壁的關鍵酵素。關於酵素於細胞中的位置、功能、及酵素的表現到現在仍未確定。本實驗以Sinorhizobium fredii CCRC 15769 為菌種,於計畫中純化羧甲基纖維素分解.。以myo-inositol 培養根瘤菌,並收集後對數期之菌體,然後使用超音波震盪法(sonication)來磨碎菌體,再使用SDS-PAGE 之活性染色法來偵測菌體酵素之同功.。再以硫酸銨沈澱、陰離子交換樹脂管柱及電泳溶離純化所需酵素,並製作其多株及單株抗體(polyclone and monoclone antibody)。再以菌體內酵素定位為主,以western blotting 法確定抗體之專一性,然後以穿透式電子顯微鏡,進行菌體中酵素之免疫定位。以溶菌.將菌體製作成原生質體(protoplast)可更能清楚辨識酵素位置。最後再以免疫金定位技術分析不同根瘤菌之羧甲基纖維素分解.之分佈。以免疫金染色之方式,經由的電子顯微鏡觀察,並配合細胞化學的技術,可以對尚未充分瞭解的根瘤菌感染初期纖維素分解.所扮演的角色,並對其機製作學術及實際應用上的探討。
    Appears in Collections:[保健營養系] 研究計畫

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