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    Title: 大豆根瘤菌之水解酵素於固氮共生初期所扮演的角色---以免疫電顯技術進行菌體與植物共生時水解酵素之定位研究
    Other Titles: The Role of Rhizobia Hydrolytic Enzymes in the Early Symbiosis---the Research of Enzyme Immunolocalization in Plant-Microbe Interaction by Using Electron Microscopy
    Authors: 胡淳怡
    Contributors: 輔英科技大學 保健營養系
    Date: 2005-08-01
    Issue Date: 2010-11-19 15:52:39 (UTC+8)
    Abstract: 豆科植物可藉由和根瘤菌的共生關係將空氣中的氮固定下來以獲得氮源。而水解酵素為根瘤菌與植物進行共生固氮作用時,根瘤菌分解植物細胞壁的關鍵酵素。關於此酵素於細胞中的位置、功能、及酵素的表現到現在仍未完全確定。本實驗以Sinorhizobium fredii CCRC 15769為菌種,於之前的實驗已進行水解酵素中的羧甲基纖維素分解酵素的確認及純化:以myo-inositol培養根瘤菌,並收集後對數期之菌體,然後使用超音波震盪法(sonication)來磨碎菌體,再使用SDS-PAGE之活性染色法來偵測菌體酵素之同功酵素,並預測其同功酵素分子量。再以硫酸銨沈澱、陰離子交換樹脂管柱及電泳溶離純化所需酵素,並製作其多株抗體(polyclone antibody)。並於去年年計畫以菌體內酵素定位為主,以western blotting法確定抗體之專一性,然後以穿透式電子顯微鏡,進行菌體中酵素之免疫定位。並以溶菌酵素將菌體製作成原生質體(protoplast)使其可更能清楚辨識酵素位置。最後再以免疫金定位技術分析不同根瘤菌之羧甲基纖維素分解酵素之分佈。今年計畫則以植物實驗為主:先以不同種類之大豆異黃酮進行非共生菌體誘導及免疫金分析實驗; 之後進行大豆植物與S. fredii CCRC15769之吸附及結瘤等實驗。再以免疫金染色之。再於相同的實驗加入2, 4-D(chlorophenoxy compounds)除草劑及其它添加劑如 PEG 6000 or 8000 (50%的聚二乙醇溶液,polyethylene glycol)之種子滲透劑及純化後之纖維酵素。種子經過PEG處理以後,也可以減少真菌或細菌的感染。甚至於活度已下降的種子,也可已經處理來提昇其發芽能力。最後觀察菌體與植物結合時,羧甲基纖維素分解酵素的變化,以瞭解此酵素於菌體中的功能與其於固氮共生初期所扮演的角色。
    Appears in Collections:[保健營養系] 研究計畫

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