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    Title: 以二維膠體電泳及液相層析質譜儀進行本土性大豆根瘤菌水解酵素之蛋白質體分析
    Other Titles: Proteomic Analysis of Hydrolytic Enzyme in Indigenous Soybean Rhizobia by 2-D Gel Electrophoresis and Liquid Chromatography-Mass Spectrometry
    Authors: 胡淳怡
    Contributors: 輔英科技大學 保健營養系
    Keywords: 水解酵素;二維式電泳法;類黃酮;液態層析質譜儀
    Date: 2007-08-01
    Issue Date: 2010-11-22 15:25:52 (UTC+8)
    Abstract: 豆科植物可藉由和根瘤菌的共生關係將空氣中的氮固定下來以獲得氮源。而水解酵素為根瘤菌與植物進行共生固氮作用時,根瘤菌分解植物細胞壁的關鍵酵素。關於此酵素於細胞中的位置、功能、及酵素的表現到現在仍未完全確定。本年度以蛋白質體實驗為主:本實驗以Sinorhizobium fredii CCRC 15769為菌種,於之前的實驗已進行水解酵素中的羧甲基纖維素分解酵素的確認及定序:以myo-inositol培養根瘤菌,並收集後對數期之菌體,然後使用超音波震盪法(sonication)來磨碎菌體,再以硫酸銨沈澱初步純化蛋白質,並收集其60~80%之分劃。然後以二維式電泳法,並比較不同培養基及誘導劑類黃酮的添加後,及根瘤中類菌體電泳片中酵素色帶 (spot) 的消長,並經由資料庫之比對,找出屬於水解酵素之位置。再經由蛋白分解酵素作用成小片段,之後進行液態層析質譜儀 (LC-Mass)的分析,再進行氨基酸全序列定序,並比較實驗結果與資料庫之相似度,並以western blotting法進行驗證,以進一步瞭解根瘤菌水解酵素之蛋白質體之特性,以瞭解此酵素於菌體中的功能與其於固氮共生初期所扮演的角色。
    Appears in Collections:[保健營養系] 研究計畫

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