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    Title: 熱休克蛋白70結構及功能的研究
    Other Titles: Structural and Functional Studies of Hsc70
    Authors: 黃小萍
    Contributors: 輔英科技大學 醫學檢驗生物技術系
    Keywords: 熱休克蛋白70;分子監護子;螢光淬熄法;螢光向異性;heat-shock protein 70;molecular chaperone;fluorescence
    Date: 1994
    Issue Date: 2010-11-24 14:51:15 (UTC+8)
    Abstract: 熱休克蛋白70(hsc70),是一個七萬道爾頓的分子監護子.它是一個ATP水
    解 ,同時也是一個 結合蛋白.可想而知,水解ATP所釋出的能量可用於
    所結合的蛋白質的摺疊或解摺疊的過程.這篇論文是以大白鼠的hsc70的重
    組蛋白去研究這個蛋白質的結構及功能間的關係.第一,使用定點突變法研
    究與hsc70水解ATP活性有關的 基酸殘基.將天冬 酸改成天冬醯 ,得到
    了突變種hsc70(D10N),分析這個突變種顯示它不僅無法被 激發水解
    ATP的活性,並且也失去了它的內生性水解ATP之能力.而另一方面它對ATP
    的解離常數是0.3uM,對於S- 的解離常數是5uM.這些都與hsc70相同.顯
    示hsc70(D10N)這個突變種的缺失的確是發生在ATP水解的過程.另外,我構
    築而得到一刪去型突變種(Nt-hsc70),它只含有四萬四千道爾頓的 端之
    ATP水解 區間,並分析其特性,發現它在沒有 出現時水解ATP之活性
    是 270 nmol/hr/mg,其活性可與hsc70加了 以後所得之活化相比擬.而
    且, Nt-hsc70的D10N突變種(Nt-hsc70(D10N)),亦只有非常低的ATP水解
    活性.這個結果顯示hsc70的天冬 酸-10對催化ATP水解而言是很重要的.
    第二,以螢光光譜學研究hsc70分子中兩個色胺酸殘基的區域性環境.為了
    解析hsc70分子中兩個色胺酸殘基的內生性螢光,兩個色胺酸分別被置換成
    其它的 基酸.色胺酸-90被改為白 酸,色 酸-580則被換成苯丙 酸.產
    生hsc70(W90L)及hsc70(W580F)兩個突變種,經純化後,並分析其特性.這兩
    個突變種經証明仍保有受 激活之水解ATP的特性,因此使用螢光淬熄法
    研究這兩個色胺酸殘基的區域性環境.使用的淬熄劑是丙烯醯 ,碘離子和
    銫離子.結果顯示,兩個色胺酸殘基都不是暴露在hsc70的表面也不是埋藏
    在hsc70的疏水性中心.最後,研究在有或無 或ATP出現時hsc70分子
    中兩個色 酸殘基的螢光向異性.結果顯示兩個色胺酸殘基的螢光向異性
    會因某些 的出現而下降,而ATP的出現卻不會改變這兩個色 酸殘基的
    螢光向異性.
    Relation: 國立清華大學 生命科學研究所 博士論文
    Appears in Collections:[醫學檢驗生物技術系] 博碩士論文

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